日本同仁化學CCK-8試劑盒 Cell Counting Kit-8（CCK-8試劑盒）是由同仁化學研究所（Dojindo）開發(fā)的檢測細胞增殖、細胞毒性的試劑盒，為MTT法的替代方法，試劑盒中采用自己開發(fā)的水溶性四唑鹽-WST-8，在美國，歐洲等國家地區(qū)均持有證書，同仁化學研究所于2006年在中國獲得了WST的注冊商標。

CCK-8法與普通的MTT法相比，具有顯著特點：

★靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好

★操作簡便，省時省力

★水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細胞

★無需放射性同位素和有機溶劑，對細胞毒性低

★為1瓶溶液，毋需預制，即開即用

★適合于高通量藥物篩選

CCK-8用途：藥物篩選、細胞增殖測定、細胞毒性測定、腫瘤藥敏試驗

CCK-8試劑盒在國內(nèi)科研院所、重點大學、*醫(yī)院被廣泛應用，認可度高，使用CCK-8發(fā)表的中外文獻達600多篇，其中截止08年底SCI影響因子IF＞10分的論文有37篇，高IF38.5分

[Heterozygosity with respect to Zfp148 causes complete loss of fetal germ cells during mouse embryogenesis,Nature Genetics33, 172 - 176 (01 Feb 2003)]

CCK-8試劑與MTT等方法靈敏度比較

CCK-8試劑毒性：CCK-8和其他檢測方法對比可以得出——CCK-8對細胞幾乎無毒性，不傷害細胞，細胞可重復利用

CCK-8 P公司產(chǎn)品 R公司產(chǎn)品

(操作說明請參考中英文說明書或來電/在線咨詢）

CCK-8 試劑盒利用了同仁化學研究所（Dojindo）開發(fā)的四唑鹽——WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)，它在電子載體1-Methoxy PMS存在的情況下能夠被還原成水溶性的甲臜染料。CCK-8溶液可以直接加入到細胞樣品中；不需要預配各種成分。CCK-8法是用于測定細胞增殖或細胞毒性試驗中活細胞數(shù)目的一種高靈敏度，無放射性的比色檢測法。CCK-8被細胞內(nèi)脫氫酶生物還原后生成的橙色甲臜染料能夠溶解在組織培養(yǎng)基中，生成的甲臜量與活細胞數(shù)量成正比。WST-8法檢測細胞增殖、細胞毒性實驗的靈敏度比其它四唑鹽如MTT, XTT, MTS或WST-1高。由于CCK-8溶液相當穩(wěn)定，并且對細胞沒有毒性，因此可以長時間孵育。日本同仁化學CCK-8試劑盒

CCK-8 檢測步驟

1. 向各孔中加入100 μl細胞懸液。a)

2. 在37℃下預孵育培養(yǎng)板。b)

3. 向各孔中加入各濃度的待測溶液c)10 μl。

4. 37℃下孵育。

5. 向各孔中加入10 μl的CCK-8溶液d)。

6. 37℃下孵育1-4小時。e)

7. 測定450 nm處的OD值。

a) 使用適當?shù)呐囵B(yǎng)基制備50,000-100,000個/ml的細胞懸液。

b) 建議使用CO2培養(yǎng)箱過夜預培養(yǎng)。

c) 使用培養(yǎng)基或PBS來制備溶液。

d) 如果待測溶液有還原性，測定不含細胞，但含有CCK-8的待測溶液在450 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小，則可以直接加入CCK-8 ，如果吸光度相對較大，則需要除去培養(yǎng)基，并用培養(yǎng)基洗滌細胞兩次，然后加入新的100 μl培養(yǎng)基和10 μl CCK-8進行檢測。

e) 白細胞可能需要培養(yǎng)較長時間。

活力計算

細胞活力*（％）=[A(加藥)-A（空白）]/[A（0加藥）-A（空白）] ×100

A（加藥）：具有細胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A（空白）：具有培養(yǎng)基和CCK-8溶液而沒有細胞的孔的吸光度

A（0加藥）：具有細胞、CCK-8溶液而沒有藥物溶液的孔的吸光度

*細胞活力：細胞增殖活力或細胞毒性活力

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