OVCAR-8/ADR 人卵巢癌腺癌阿mei素耐藥細(xì)胞

細(xì)胞介紹

OVCAR-8/ADR為由OVCAR-8細(xì)胞構(gòu)建的耐ADR藥物細(xì)胞株。

細(xì)胞特性

1） 來源：高級(jí)別卵巢漿液性腺癌  女  64歲

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣  貼壁生長

3） 含量：>1x106  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10X,20X）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的wan全培養(yǎng)基6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的wan全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。                       

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

1.  準(zhǔn)備RPMI-1640（培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%

  細(xì)胞培養(yǎng)試劑的配制

1）ADR藥物的配制及保存

建議將ADR藥物配制成1mg/mL的母液，即使用10mL PBS溶液溶解10mg ADR藥物，使其wan全溶解后，使用0.22um濾器過濾除菌。

注意：可根據(jù)用量配置藥物，并將藥物分裝保存，避免反復(fù)凍融導(dǎo)致藥物失效。溶解后的Taxol，4℃保存1周，-20℃保存1個(gè)月，-80℃保存6個(gè)月。

2）凍存液的配制

90%優(yōu)質(zhì)胎牛血清+10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。（凍存液中不含藥物）

3）wan全培養(yǎng)基的配制（推薦使用iCell-h382-001b）

2  培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3  凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

二、細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mLwan全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，wan全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8mlwan全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25％（w / v）yi蛋白mei-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的wan全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

下面T25瓶為例；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項(xiàng)

1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2.收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。

3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。

4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

5.客戶在細(xì)胞培養(yǎng)過程中，有任何技術(shù)問題可以聯(lián)系我們售后，隨時(shí)給予解答。

OVCAR-8/ADR 人卵巢癌腺癌阿mei素耐藥細(xì)胞相關(guān)熱賣細(xì)胞

A2780+GFP 人卵巢癌細(xì)胞+GFP

人肺癌細(xì)胞+RFP A549+RFP

 人肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 A549+luc

人轉(zhuǎn)移胰腺腺癌細(xì)胞吉西他濱耐藥株 AsPC-1/GEM

 人膽囊癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 GBC-SD+LUC

人永生化表皮細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HACAT+LUC

人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HCC827+LUC

人結(jié)腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HCT116+LUC

人結(jié)直腸癌氟niao嘧啶耐藥株 HCT15/Fu

人結(jié)直腸癌zishan醇耐藥株 HCT-15/Taxol

人宮頸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HELA+LUC  

人胃癌細(xì)胞黃色熒光標(biāo)記 HGC-27+YFP

人真皮成纖維細(xì)胞（原代細(xì)胞永生化） HSF(SV40)

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（原代細(xì)胞永生化） HUVEC

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化+RFP HUVEC+RFP

人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化+GFP HUVEC+GFP

人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟niao嘧啶耐藥株 LOVO/5FU

人結(jié)直腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 LOVO+LUC

人肝星形細(xì)胞+GFP LX-2+GFP

人乳腺癌阿mei素耐藥細(xì)胞 MCF-7/Adr

人乳腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 MCF-7+luc

人乳腺癌X細(xì)胞+GFP MDA-MB-231+GFP

人乳腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 MDA-MB-231+LUC

人高轉(zhuǎn)移性肝癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 MHCC-97H+luc

人胃癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 NCI-N87+LUC

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 sh-sy5y轉(zhuǎn)染突變型

人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 sh-sy5y轉(zhuǎn)染野生型

人乳腺癌細(xì)胞 SK-BR-3+LUC

人皮膚黑色素瘤細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 SK-MEL-2+LUC

人卵巢癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 SK-OV-3+LUC

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞+luc SW620+luc

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞+GFP SW620+GFP

人結(jié)直腸癌細(xì)胞氟niao嘧啶耐藥株 SW620/5FU

人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫cuo胺細(xì)胞 U251 MG/TMZ

人類星形膠質(zhì)瘤耐替莫cuo胺細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 U251 MG/TMZ+LUC(3000)

人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤+RFP U87MG+RFP

云南宣威人肺腺癌細(xì)胞系+GFP XWLC-05+GFP

人乳腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 ZR-75-1+luc

小鼠乳腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 4T1+luc

小鼠黑色素瘤細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 B16-F10+LUC

小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 CT26+LUC

小鼠膠質(zhì)細(xì)胞瘤熒光素酶標(biāo)記 GL-261+luc

小鼠肝癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 HEPA1-6+LUC

小鼠卵巢上皮癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 ID8+LUC

小鼠骨肉瘤成骨細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 K7M2WT(K7M2-WT)-LUC

小鼠肺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 LLC+LUC

小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 MC38+LUC

小鼠胚胎成纖維細(xì)胞 MEF(絲lie霉suC處理)

小鼠腦神經(jīng)瘤細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 neuro-2a+luc

小鼠胰腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 panc02+LUC

小鼠單核巨噬細(xì)胞白血病細(xì)胞+GFP RAW 264.7+GFP

小鼠前列腺癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記 RM-1+LUC

大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞綠色熒光標(biāo)記 C6+LUC

大鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤細(xì)胞低分化+GFP PC12低分化+GFP

中國倉鼠卵巢細(xì)胞k1 亞克隆系 CHO-K1（懸?。?/span>

鴨胚胎成纖維細(xì)胞 Duck embryo

人膽囊上皮細(xì)胞永生化

人胰腺癌相關(guān)成纖維細(xì)胞永生化

人胰腺癌細(xì)胞永生化

人膽囊上皮細(xì)胞永生化+GFP GFP

C57小鼠巨噬細(xì)胞永生化

豬扁桃體上皮細(xì)胞永生化

人風(fēng)濕性關(guān)節(jié)滑膜成纖維細(xì)胞永生化

豬脂肪干細(xì)胞永生化

鴨胚肝間質(zhì)細(xì)胞永生化

羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞永生化

兔肝間質(zhì)細(xì)胞永生化

人頸靜脈球瘤細(xì)胞永生化

人主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞永生化